تهیه گسترش
برای تهیه گسترش باید از لام خشک، تمیز و عاری از چربی استفاده نمود.
با پیپت پاستور استریل کمی از محیط مایع برداشته و به سطح لام منتقل کنید.
سپس آنرا مانند ورقی در سطح لام بگسترانید. گسترش نباید زیاد نازک یا زیاد ضخیم باشد.
یک قطره سرم فیزیولوژی روی سطح لام قرار دهید.
سپس به کمک آنس یا لوپ مقداری از تک کلونی باکتری را در آن حل کرده و آنرا با حرکت دورانی روی سطح لام پخش نمایید.
خشک کردن
پس از تهیه گسترش آنرا در هوای آزمایشگاه قرار می دهند تا خشک شود. برای خشک کردن نباید از حرارت استفاده شود. ( کل فرآیند خشک کردن همینه دیگه چیز خاصی نداره نیازی به توضیح اضافی نداره اینجا ).
فیکس یا ثابت کردن
از آنجایی که بر اثر رنگ آمیزی و شستشوی مکرر ممکن است میکروبها از سطح لام کنده شوند لازم است تا گسترش تهیه شده فیکس شود.
فیکس کردن با انعقاد پروتئین های باکتری و سلولها سبب چسبیدن میکروارگانیسمها به سطح لام و جلوگیری از کنده شدن آنها در حین شستشو می گردد.
نکته حفاظتی: فیکس کردن ممکن است سبب مرگ ارگانیسم ها نشود بنابراین همواره باید گسترش را به عنوان منبع عفونت و آلودگی در نظر گرفت.
روش های فیکساسیون
راحتترین روش فیکس کردن است. به این منظور 4-3 بار به آهستگی لام را از روی شعله عبور می دهند.حرارت زیاد باعث سوزاندن میکروبها و عناصر سلولی و غیر قابل تشخیص شدن آنها می شود. حرارت باید به اندازه ای باشد که پشت دست را نسوزاند.
یه نکته مهم اینکه ثابت کردن لام با متانول از لیز گلبولهای قرمز جلوگیری می کند در نتیجه لام شفاف تر دیده می شود.
در این روش چند قطره متانول را روی سطح گسترش خشک شده می ریزند و بعد از 1دقیقه اضافی آنرا خالی کرده و اجازه می دهند تا بقایای متانول تبخیر شده و لام در معرض هوا خشک شود.در این روش از حرارت استفاده نمی شود. ( روش اولی خب راحته و بیشتر استفاده میشه ).
مطلب بعدی رو در مورد رنگ آمیزی گرم باکتری ها اختصاص میدهم. میخواستم الان بگما ولی وقت نشد (:
