کیت استخراج DNA چیست؟

کیت استخراج DNA چیست؟

بهتر است قبل از توضیح درباره‌ی کیت استخراج DNA  کمی درمورد استخراج DNA صحبت کنیم تا با این فرایند بسیار مهم و کاربردی آشنا شویم. استخراج DNA به فرایندی گفته می‌شود که در طی آن مولکول DNA با استفاده از روش های فیزیکی و شیمیایی

از نمونه ی مورد نظر ( ویروس ، باکتری ، سرم ، خون ، نمونه های گیاهی و.... )  جدا می‌شود. استخراج DNA برای انواع کاربرد های زیست شناسی مولکولی به‌کار می‌رود و امروزه با توجه به پیشرفت گسترده‌ی علوم می‌توان برای شناخت بسیاری از پدیده ها‌‌ی زیستی  از آن کمک گرفت. استخراج DNA از زمانی که در سال 1869 برای اولین بار انجام شد تا به امروز پیشرفت های چشمگیری کرده است.

به طور کلی استخراج DNA اساسا از چهار مرحله تشکیل شده است که شامل مراحل زیر است :

1. تهیه عصاره سلولی

برای تهیه ی عصاره سلولی از بافت یا سلول های مورد نظر ، ابتدا غشاهای سلولی را با استفاده از بافر از بین می‌بریم. سپس از EDTA برای از بین بردن یون های Mg+2  که برای حفظ ساختار کلی غشای سلول ضروری است، استفاده می کنیم. در نهایت با استفاده از SDS چربی های غشای سلول را از بین می بریم که این کار نیز به حفظ ساختار سلول کمک می کند. بقایای سلولی و دیگر اجزای هضم شده را با سانتریفیوژ ته نشین می کنیم تا عصاره سلولی دیده شود.

لازم به یادآوری است که DNA را می توانیم از هر نمونه ای استخراج کنیم ولی عموما  نمونه‌ی خون محیطی بهترین نوع نمونه برای ما است.

1. خالص سازی DNA از عصاره سلولی

روش متداول برای خالص سازی DNA اضافه کردن محلول آلی فنول_کلروفرم است. این حلال های آلی باعث رسوب پروتئین می شوند و اسید های نوکلئیک را در محلول های آبی رها می‌کنند.

فنول ماده ای با خاصیت اسیدی بالایی است که می تواند مولکول های زیستی مانند پروتئین ها را از بین ببرد. با توجه به پایین بودن حلالیت فنول ، پس از مخلوط شدن با نمونه های آبی حاوی DNA و پروتئین دو فاز جدا از هم تشکیل می‌دهد.

1. تغلیظ نمونه های DNA

برای تغلیظ کردن نمونه از اتانول استفاده می کنیم که در حضور نمک و در دمای 20- درجه سانتی گراد و یا کمتر می تواند باعث رسوب DNA شود.

1. اندازه گیری خلوص و غلظت DNA
   

برای اندازه‌گیری غلظت DNA از طیف سنجی استفاده می‌کنیم که می‌توان جذب UV را با دقت اندازه‌گیری کرد. میزان تابش اشعه  ماورای بنفش جذب شده ، توسط محلول های DNA مستقیما با مقدار نمونه متناسب است. بهتر است بدانیم عصاره ی سلولی حاوی مقادیری RNA می باشد که برای حذف آن از آنزیم ریبونوکلئاز استفاده می‌کنیم.

روش هایی که برای استخراج DNA به کار می‌رود متفاوت بوده که بسته به نوع نمونه ، اندازه و زمان نمونه گیری متفاوت هستند اما با این حال به وجود اشتراکاتی بین این روش ها دیده می‌شود. بهترین روش ها برای استخراجDNA  استفاده از کیت های تحقیقاتی و روش نمک زدن است که استفاده از کیت ها نسبت به تمامی روش ها ارجحیت دارد.

کیت ها به دو دسته ی تحقیقاتی ( الایزا، PCR ، استخراج و آمینو اسید )  و آزمایشگاهی ( اعتیاد ، بارداری ، بیماریهای قلبی ، بیماری های عفونی و کرونا )  تقسیم می‌شوند که هر کدام کاربرد های مخصوص به خود را دارد.

امروزه با توجه به پیشرفت دانش زیست شناسی ، استفاده از کیت های تحقیقاتی نسبت به قبل افرایش یافته و همین امر موجب افزایش تقاضا برای کیت های تحقیقاتی شده است.

استخراج DNA با روش نمک زدن ( Salting out ) :

به طور کلی این روش شامل لیز کردن سلول با یک دترجنت یا شوینده ، حذف پروتئین ها با نمک و پروتئیناز K و سرانجام رسوب با اتانول می باشد.

مراحل به شرح زیر است :

1. اضافه کردن آب مقطر به عنوان بافر لیز کننده
2. اضافه کردن بافر لیز کننده که از این بافر جهت لیز کردن و یا از بین بردن دیواره‌ی هسته استفاده می شود
3. که از ترکیب 3 ماده NACL ،EDTA و Tris با غلظت های خاص آماده می شود.
4. اضافه کردن SDS %10  جهت دناتوره کردن پروتئین
5. اضافه کردن پروتئیناز K
6. اضافه کردن NACL اشباع که ضمن حذف پروتئین ها با اتصال به DNA  ، آن را از سایر قسمت ها جدا می‌کنیم.
7. اضافه کردن اتانول مطلق ، برای کریستاله کردن DNA و ظاهر شدن رشته های DNA
8. ظاهر کردن بافر TE جهت حل شدن رسوب DNA

کیت های استخراج DNA  با استفاده از پروتکل های بهینه شده ، قادر به جداسازی DNA ژنومی از طیف وسیعی از انواع نمونه است. اساس کار کیت های استخراج که برای جداسازیDNA ، RNA  و پروتئین به کار می روند به گونه ای است که خون ، بافت تازه و یا فریز شده ، سرم ، گیاه و .....از ماده‌ی مورد نظر استخراج شده و مورد آزمایش قرار می گیرد. کیت های استخراج DNA در دو قالب مهره ای و ستونی وجود دارد که قالب ستونی آن کاربرد بیشتری دارد.

کیت های استخراج DNA شامل :

پروتئیناز K

بافر تخریب کننده

بافر حلال

پروتئاز

محلول لیزین

ایزوپروپانول

بافر شستشو1 ( بهتر است قبل از استفاده برای اولین بار ، به بافر 8 میلی لیتر اتانول 96 _ 100 % اضافه کنیم.)

بافر شستشو2 ( قبل از استفاده برای اولین بار ، 40 میلی لیتر اتانول 96_100 % اضافه کنیم. )

شرایط نگهداری :

محتویات کیت بهتر است در دمای 15 الی 25 درجه نگهداری شود.

کمپانی Glenbio یک کمپانی انگلیسی تولید کننده انواع کیت آزمایشگاهی و سایر تجهیزات آزمایشگاهی می باشد که با ورود به وب سایت این کمپانی می توانید اطلاعات بیشتری کسب کنید.

لطفا جهت اخذ مشاوره و استعلام قیمت با کارشناسان شرکت کیمیا طب گستر تماس حاصل بفرمایید.

منبع: هلدینگ KTG

مقاله: کیت استخراج DNA چیست؟