سلام به همراهان عزیزم در این بخش به معرفی استاد حمیدرضا زارعی از مدرسان زیست و مدیر زیست پلاسم خواهیم پرداخت.جهت ارتباط با استاد حمیدرضا زارعی و مشاهده نمونه تدریس زیست استاد زارعی از طریق پیج اینستاگرام ایشان اقدام فرمایید: zistplasm@
برای مشاهده نمونه تدریس استاد حمیدرضا زارعی بر روی لینک زیر کلیک فرمایید
مشاهده نمونه تدریس استاد حمیدرضا زارعی(کلیک کنید)
تصویر استاد زارعی مدرس زیست
روش صحیح مطالعه زیست از نگاه بهترین اساتید زیست ایران
در رشته تجربی و برای قبولی در رشته های خانواده پزشکی و دندان و دارو بدون شک زیست‌شناسی مهمترین و تعیین کننده‌ترین درس و سلطان و امپراتور تمام دروس است .بدون شک ضریب بالای زیست شناسی در رشته تجربی و همچنین ضعف مفرط دانش آموزان در این درس باعث گردیده زیست شناسی، نقشی بسیار سرنوشت ساز و تعیین کننده در قبولی یا عدم قبولی دانش آموزان رشته تجربی داشته باشد.
زیست شناسی به نوعی خطرناک ترین درس ،در بین دروس رشته تجربی می باشد ،زیرا اکثر دانش آموزان رشته تجربی دارای این توهم هستند که در زیست شناسی مسلط هستند و یا اگر کمی آن را بخوانند به زودی مسلط خواهند شد ،در حالی که میانگین درصد زیست شناسی در کنکور سال های اخیر ،چیزی در حدود ۸ الی ۱۴ درصد بوده است و این نشانگر آن است که ،دانش آموزان رشته تجربی در توهمی بزرگ قرار دارند .عمق فاجعه را هنوز درک نکرده‌اند، بنابراین ندانستن برخی از مطالب و یا عدم دانش ،در خصوص بعضی از مطالب زیست شناسی چیزی طبیعی است، اما اگر شما به عنوان دانش آموز این توهم را در ذهن تان داشته باشید ،زیست شناسی را خوب مسلط هستید، اما در دنیای واقعی مطالب این درس را عمیقاً و به خوبی فرا نگرفته باشید و آنها را به صورت سطحی خوانده باشید این سطحی خواندن مطالب باعث سقوط شما در کنکور تجربی خواهد شد ،زیرا هنگامیکه مطالب زیست شناسی را سطحی می خوانید و تصور می کنید که آنها را فرا گرفته اید نه تنها در کنکور به سوالات زیست شناسی پاسخ درستی نمی دهید ،حتی ممکن است این توهم باعث شود اسرار به حل تمامی تست های زیست شناسی در سر جلسه کنکور داشته باشید و این اصرار باعث می شود ،درصدی منفی را کسب نمایید .درصد زیست شناسی در کنکور سال ۹۶ به صورت میانگین چیزی حول و حوش ۳۸ درصد و در کنکور سال ۹۷ چیزی حدود ۱۲ درصد و در کنکور ۹۸ چیزی در حدود ۱۴ درصد بوده است و این نشان دهنده ضعف شدید دانش آموزان تجربی در درس زیست شناسی است .
نمونه تدریس زیست زارعی را از اینجا ببینید
البته از این موضوع نیز غافل نشویم ،که در کنکورهای سالهای اخیر سوالات زیست شناسی بسیار مفهومی و عمیق و دشوار طراحی می گردند .بنابراین برای موفقیت در این درس باید از کتب و دی وی دی های آموزشی مناسب و از کلاس های آنلاین یا کلاسهای حضوری مناسب استفاده نمایید، در غیر این صورت اگر بخواهید خودتان صرفاً به تنهایی با این درصد دشوار دست و پنجه نرم کنید به احتمال بسیار زیاد نتیجه مطلوبی را به دست نخواهید آورد .ما در ادامه مقاله ضمن مقایسه دبیران زیست کنکور و با معرفی بهترین دبیران زیست ایران و بهترین دبیران زیست کنکور و معرفی بهترین کتب زیست شناسی موجود در بازار و معرفی بهترین دی وی دی آموزش زیست کنکور شما را در این مسیر دشوار راهنمایی خواهیم نمود .
نمونه تدریس زیست زارعی را از اینجا ببینید برای مطالعه موثر زیست‌شناسی به عقیده بهترین اساتید زیست ایران و بهترین اساتید زیست کنکور باید تک به تک سطور کتابهای درسی زیست شناسی را حفظ باشید .مجددا تاکید می کنم، مفاهیم و برداشت آزاد خیر! بلکه در حفظ کردن خط به خط سطور کتاب درسی شما برای مطالعه زیست شناسی با تعداد بسیار زیادی از نکات ریز و درشت روبه‌رو هستید که ،یادگیری آنها کاری بسیار دشوار و زمانبر است. بنابراین بنا بر توصیه برترین اساتید زیست ایران و برترین اساتید زیست کنکور برای فراگیری دنیای از نکات ریز و درشت که در این درس قرار دارد ،باید هر روز زمانی را برای مطالعه زیست شناسی اختصاص دهید .شاید در سایر دروس همانند ریاضی و فیزیک و شیمی فقط ساعت‌هایی در هفته را به مطالعه و تست زنی اختصاص دهید، اما زیست شناسی درسی است که باید و باید و هر روز و هر روز مورد مطالعه شما قرار گیرد. بهترین دبیران زیست شناسی ایران برای موفقیت شما در درس زیست شناسی به شما توصیه می کنند که پیش از شروع کلاسهای آنلاین یا کلاسهای حضوری چیزی حول و حوش ۱۵ الی ۳۰ دقیقه مطالب مربوط به آن جلسه را پیش مطالعه کنید .حتی اگر تمام مفاهیم را درک نمایید اشکالی ندارد این پیش مطالعه به شما یاری می کند تا در هنگامی که دبیر محترمتان مشغول تدریس مباحث است. آن مباحث در ذهن شما نا آشنا نباشد و یادگیری تسهیل گردد، شما می توانید این پیش مطالعه را ساعت های قبل از شروع کلاس آنلاین یا کلاس حضوری خود انجام دهید و یا قبل از برگزاری کلاس آنلاین یا کلاس حضوری خود این پیشخوانی و این پیش مطالعه را انجام دهید تا ذهنتان آمادگی ورود مطالب جدید را داشته باشد و با این آمادگی در زمان کمتری اطلاعات را بتواند طبقه‌بندی و ذخیره نماید ،اما بنابر توصیه بهترین اساتید زیست ایران و بنا بر توصیه بهترین اساتید زیست کنکور هنگامی که در کلاس آنلاین زیست و یا در کلاسهای حضوری زیست‌شناسی حاضر می‌شوید،
نمونه تدریس زیست زارعی را از اینجا ببینید
دقت کنید که مهم ترین و اساسی ترین بخش یادگیری همین مرحله است ،یعنی مراحل پیش مطالعه و مراحل پس مطالعه اگرچه مهم هستند ،اما مرحله آموزش در کلاس درسی مهمترین مرحله در مراحل آموزشی شماست .سعی کنید کلاس های درسی آنلاین یا کلاس های درسی حضوری را به صورت آن تایم حضور یابید .هنگامی که با عجله و نفس زنان خود را به کلاس درسی می‌رسانید، احتمالاً ضریب یادگیری شما کاهش زیادی خواهد داشت، اما وقتی از ۲۰ الی ۳۰ دقیقه پیش از شروع کلاس خود را به کلاس درسی می‌رسانید ،ذهن با آرامشی کامل آمادگی دریافت مطالب جدید را خواهد داشت .حتی اگر کلاس آنلاین زیست شناسی دارید، برای کلاس های آنلاین دقایقی قبل از کلاس آنلاین شوید و در سر کلاس درس حضور داشته باشید، تا با آرامش بیشتری بتوانید مباحث را دنبال نمایید.
نمونه تدریس زیست زارعی را از اینجا ببینید
هنگام حضور در کلاسهای درسی دقت نمایید که در درس زیست شناسی جزء دروسی است ،فرایند محور یعنی شما باید هنگام مطالعه و یادگیری زیست تلاش کنید ،فرآیندها و توالی های موجود در دروس را به خوبی درک کنید و مطالب را به صورت طبقه بندی شده در ذهن خود طبقه بندی نمایید. همچنین هنگام حضور در کلاس های درسی زیست شناسی چه کلاس آنلاین زیست و چه کلاس حضوری زیست به هیچ عنوان تا مطلبی را یاد نگرفتید، از کنار آن عبور ننمایید و حتماً در کلاس درسی حضوری پویا و بانشاط داشته باشید و با مشارکت در بحث های کلاسی اجازه ندهید که خمودگی باعث کاهش کیفیت کار شما شود .همینطور اگر مبحثی یا بخشی را متوجه نشدید ،حتما از استاد محترم تان بخواهید تا دوباره برای شما مطالب را شرح داده و ابهامات شما را رفع نماید. همچنین هنگام حضور در کلاسهای درسی نکته برداری را فراموش ننمایید ،مطمئناً دبیران حرفه ای زیست شناسی با تجربه چندین ساله خود ،می توانند با روانشناسی طراحان کنکور آشنا بوده و نکات طلایی و مطالبی را که ممکن است از زیر چشمان شما رها شود و توجه کافی به آن ها را نداشته باشید، به شما آموزش خواهند داد .همچنین بنا بر توصیه بهترین دبیران زیست شناسی ایران و بهترین دبیران زیست شناسی کنکور تلاش نمایید، پس از اتمام کلاس درسی خود مطالب را مجددا خط به خط بررسی نمایید و ابهامات خود را یادداشت نمایید و در هنگام جزوه نویسی و مطالعه جزوات دبیران محترمتان و هنگام مطالعه کتاب درسی استیکر هایی را به کتاب یا جزوات خود ارسال نمایید و نکات مهم را در روی آنها یادداشت نمایید. همچنین حاشیه نویسی جزوات و حاشیه نویسی کتاب های درسی را فراموش نکنید و در صورت نیاز مار کر کردن با رنگهای متفاوت را در جزوات و در کتابهای درسی انجام دهید ،نمودارها و دیاگرام ها و شکل های موجود در کتابهای درسی را به صورت کامل در ذهنتان اسکن کنید و همواره در ذهن خود داشته باشید .در کنکور های سنوات اخیر نمودار ها و شکل ها و گراف ها از اهمیت بسیار ویژه‌ای برخوردار گردیده اند ،همچنین برای مطالعه زیست شناسی افعال و قیود را به دقت بررسی نمایید.
مثلاً ممکن است در کتاب درسی شما نوشته شده باشد، اکثر مهره‌داران دارای چنین ویژگی هایی هستند یا نوشته شده باشد اغلب مهره‌داران دارای چنین ویژگی هایی هستند و یا نوشته شده باشد برخی از مهره داران دارای چنین ویژگی هایی هستند ،پس شما هنگام مطالعه تمام این قید ها از قبیل اغلب اکثر همه برخی را به صورت کامل توجه نموده و حفظ نمایید. شما اگر می‌خواهید در درس زیست شناسی به تسلط کافی برسید، نباید سطح علمی تان را به سطح علمی یک دانش آموز قوی برسانید ،بلکه شما باید در این درس به درجه استاد بزرگی برسید، یعنی برای موفقیت در تست های زیست شناسی یک دانش آموز خوب و قوی بودن کفایت نمی کند، بلکه باید آنقدر این درس را خوب مطالعه کرده باشید که سطح سواد تان همپای برترین اساتید کنکور ایران باشد. حتی جالب است گاهی سوالاتی در کنکور طراحی می شود و شما باید به اندازه ی یک پزشک دانش داشته باشید تا بتوانید به آن سوال پاسخ دهید ،بنابراین برای آن که به بالاترین درجه آموزشی در این درس برسید ،با تمرین و ممارست زیاد و با مطالعه منابع و رفرنس های متفاوت سطح علمی تان را به سطح برترین اساتید کنکور زیست شناسی برسانید .بنا بر توصیه برترین اساتید زیست شناسی ایران پس از پیش مطالعه و پس از تدریس دبیرستان و پس از مطالعه خط به خط جزوات و کتاب درسی نوبت آن فرا می رسد که ،با حل تمرینات و تست های متنوع دانش به وجود آمده را در ذهن خود به صورت کامل هک و تثبیت نمایید .بدین منظور شما باید از کتب و منابع متفاوتی در زیست شناسی استفاده نمایید .ازکتاب‌های خوب زیست شناسی موجود در بازار می توانیم ،به کتاب زیست شناسی میکرو طبقه بندی گاج و کتاب زیست شناسی خیلی سبز و کتاب زیست شناسی استاد اشکان هاشمی و کتاب زیست شناسی خط ویژه گاج نوشته استاد حمیدرضا زارعی اشاره نمایم ،که شما با تهیه تمامی منابع بالا و تنظیم زمان مناسب ،باید تمامی تست‌های این کتب را آنالیز و بررسی نموده و به آنها پاسخ دهید .بنابر توصیه بهترین دبیران زیست کنکور ،مهمترین مرحله پس از آموزش مرحله مرور مطالب است و شما به خوبی می‌دانید که زیست شناسی درسی فرار است و نیاز است در باکس های مطالعاتی روزانه حتماً زمان‌هایی را به مرور مطالب گذشته اختصاص دهید. شما به خوبی می دانید که اگر مطلبی را به عنوان مثال در شهریور ماه بخوانید ،این مطالب به احتمال بسیار زیاد در بهمن ماه فراموش خواهد شد ،پس برای جلوگیری از فراموشی هنگام مطالعه روزانه زیست‌شناسی دقایقی را به مطالعه دروس گذشته و یادآوری آنها اختصاص دهید.
در مصاحبه‌ای که با استاد حمیدرضا زارعی از دبیران برند زیست شناسی ایران و از نویسندگان کتاب خط ویژه گاج داشتم، ایشان توصیه های زیر را برای مطالعه موثر درس زیست شناسی ارائه فرمودند:
مورد اول ،دانش آموزان باید زیست شناسی را هر روز در باکس های مطالعاتی خود قرار داده و دستکم ۲۰ الی ۲۵ درصد از تایم کلی مطالعاتی دروس اختصاصی را به درس زیست شناسی هم به‌صورت نکات تستی و هم به صورت مفاهیم و مطالب تشریحی اختصاص دهند. مورد دوم، دانش آموزان هر بخش از کتاب زیست شناسی را ابتدا به صورت روخوانی از روی کتاب درسی مطالعه نمایند، سپس برای بارهای بعدی به مطالعه عمیق بپردازند. مورد سوم ،دانش آموزان کنکوری بهتر است فصل های موجود در کتاب های درسی یا کتاب های تستی را به قسمتهای کوچکتر تقسیم نمایند ،سپس متناسب با هر بخش کتاب درسی و جزوات اساتید و کتاب تست را در بخش های کوچک مطالعه کنند و با خط کشیدن زیر نکات مهم و زیر قیدها و صفت ها و افعال دقت خود را در تشخیص آنها افزایش دهند. همچنین پس از مطالعه کتاب درسی از روی کتاب های کمک آموزشی درسنامه مربوط به هر بخش کوچک را مطالعه نمایند ،سپس تست های همان مباحث را حل نمایند.هنگامیکه بخش اول به اتمام رسید ،همین کارها را عیناً برای بخش‌های بعدی و برای فصل‌های بعدی مجدداً تکرار نمایند .همچنین بهتر است دانش آموزان مطالب مهم و اصلی را در حاشیه کتابهای خود یادداشت نمایند ،این یادداشت کردن باعث می‌شود مطالب بهتر در ذهن آنها باقی بماند و همچنین در دوران جمع بندی خیلی سریع مطالب مهم و نکات اصلی بازیابی و یادآوری شود همینطور بهتر است تست هایی که مفهومی و یا جنبه حفظ کردنی دارند را با فاصله زمانی ۲۴ الی ۴۸ ساعت تست زنی نمایند تا اطمینان حاصل کنند که تمام مطالب حفظ کردنی وارد حافظه بلند مدت شان شده است. همینطور هنگام تست زنی ،اگر سوالی را پاسخ ندادید و یا اگر احیاناً سوالی را غلط جواب دادید اید ،دلیل عدم پاسخگویی و یا دلیل غلط زدن خودتان و همینطور دلیل غلط بودن گزینه های تست یا درست بودن گزینه های تست را نیز با دقت بررسی نمایید ،زیرا این کار باعث می‌شود در خلال کار کردن و تست زدن شما مطالب و نکات جدید و مهمی را یاد بگیرید. همینطور در درس زیست شناسی ،داشتن دفترچه خلاصه نکات بسیار مهم و ضروری می باشد .شاید در سایر درس های اختصاصی همچون ریاضی و فیزیک خلاصه نویسی نقش چندانی نداشته باشد و دبیران محترم دروس ریاضی و فیزیک به جای خلاصه نویسی ،شما را ترغیب نمایند که تست های بیشتری را حل نمایید ،اما در زیست شناسی با توجه به جنس درس و تفاوت آن با سایر دروس اختصاصی حتماً و الزاماً دفترچه ای را برای یادداشت کردن خلاصه نکات و برای یادداشت کردن نکات جدیدی که در درس تستها یاد می گیرید اختصاص دهید و تصور نکنید که این کار باعث اتلاف زمان شما می شود، بلکه این موضوع باعث می‌شود مطالب با طبقه بندی بهتری در ذهن شما ثبت شود و در دوران جمع بندی نیز بهتر بتوانید مطالب را بازیابی و جمع‌بندی نمایید .همچنین به دانش آموزان توصیه می‌شود ،برای یادگیری بهتر درس زیست‌شناسی از کلاس های آنلاین و همینطور از دی وی دی های آموزشی زیست استفاده نمایند.
زیست زارعی
روش های تحقیق زیست شناسی مولکولی
1. رویدادهای مهم در تاریخ فناوری DNA نوترکیب
2. فناوری دستکاری DNA
3. سیستم ناقل اصلی برای شبیه سازی ژن
4. جداسازی و شناسایی ژن ها
5•1 رویدادهای مهم در تاریخ فناوری DNA نوترکیب
نیمه در طول قرن گذشته، تحقیقات زیست‌شناسی مولکولی پیشرفت بی‌سابقه‌ای داشته است، و سه دستاورد عمده وجود دارد: اول، اساس مادی وراثت حل شده است - حامل مولکولی ژن‌ها DNA است؛ دوم، مدل ساختار مارپیچ دوگانه DNA. مولکول‌ها و مکانیسم همانندسازی نیمه ذخیره‌شده مشکلات خودتکثیر ژن و تناوب نسل را حل می‌کند؛ ثالثاً، «دگم مرکزی» و نظریه اپرون با موفقیت رمز ژنتیکی را رمزگشایی کرده و مکانیسم جریان و بیان اطلاعات ژنتیکی را روشن کرده‌اند.
5 • 2 تکنیک های دستکاری DNA
5 • 2 • 1 الکتروفورز ژل اسید نوکلئیک
1 • اصل اساسی ماکرومولکول های بیولوژیکی معمولاً تحت شرایط pH خاصی شارژ می شوند. آن را در میدان الکتریکی قرار دهید و با سرعت معینی به سمت الکترود مناسب حرکت می کند. سرعت مهاجرت مولکول ها تحت اثر میدان الکتریکی با شدت میدان الکتریکی و بار خالص حمل شده توسط مولکول های الکتروفورتیک متناسب است و با ضریب اصطکاک مولکول ها نسبت معکوس دارد. ضریب اصطکاک تابعی از اندازه مولکولی، قطبیت و ویسکوزیته محیط است. اجزای مختلف در مخلوطی از مولکول های پروتئین یا اسید نوکلئیک را می توان با الکتروفورز بر اساس تفاوت در اندازه مولکولی، پیکربندی یا شکل و بار خالص از یکدیگر جدا کرد.
2 • الکتروفورز ژل آگارز نمونه تدریس زیست زارعی
آگارز یک پلیمر پلی ساکارید خطی است. پودر آگارز تا نقطه ذوب حرارت داده می شود و سپس سرد و جامد می شود تا یک محیط الکتروفورز خوب تشکیل شود. آگارز کم ذوب اصلاح شده شیمیایی در دمای پایین تری ذوب می شود و اغلب برای تهیه قطعات DNA به وسیله الکتروفورز استفاده می شود.
5.2.2 هیبریداسیون مولکولی اسیدهای نوکلئیک
هنگامی که DNA یا RNA تک رشته ای خاص با هم مخلوط می شوند، بخش های همولوگ متناظر آنها (مکمل) بازپخت می شوند تا یک ساختار دو رشته ای تشکیل دهند. اگر اسیدهای نوکلئیک بازپخت شده از موجودات بیولوژیکی مختلف باشند، مولکول دو رشته ای حاصل را مولکول اسید نوکلئیک هیبریدی می نامند. مولکول‌های DNA با منشأهای مختلف که می‌توانند برای تشکیل مولکول‌های هیبریدی هیبرید شوند، ارتباط نزدیکی دارند، در غیر این صورت، رابطه ژنتیکی آنها نسبتاً دور است. بنابراین، هیبریداسیون DNA/DNA می تواند برای تشخیص وجود خویشاوندی بین ارگانیسم های بیولوژیکی خاص مورد استفاده قرار گیرد و از توانایی تشکیل مولکول های هیبریدی DNA/RNA می توان برای آشکار ساختن محل یک ژن خاص در یک قطعه اسید نوکلئیک
نمونه تدریس زیست زارعی استفاده کرد
5•2•3 دگرگونی نمونه تدریس زیست زارعی
باکتریایی تبدیل باکتریایی: یک فرآیند حیاتی که در آن یک سویه باکتریایی به دلیل جذب DNA خارجی، صفات ژنتیکی را تغییر داده است.
اشریشیا کلی یک ماده آزمایشی رایج برای زیست شناسان مولکولی و یک سویه آزمایشی مهم برای مهندسی ژنتیک است. قرار دادن E. coli به سرعت در حال رشد در محلول کلرید کلسیم هیپوتونیک که در دمای پایین (0 درجه سانتیگراد) از قبل تیمار شده است، باعث متورم شدن سلولها (تشکیل اسفروپلاست) و ایجاد چسبندگی به DNA اگزوژن در مخلوط تبدیلی روی سطح سلول می شود. بلافاصله سیستم را به دمای 42 درجه سانتیگراد برای تحریک حرارتی مختصر انتقال دهید و کمپلکس ها توسط سلول ها جذب می شوند. سویه های تغییر یافته ژنتیکی با تنوع به ارث می رسند.
5•2•4 آنالیز توالی نوکلئوتیدی نمونه تدریس زیست زارعی
آنالیز ابزاری به سرعت در حال توسعه است.نمونه تدریس زیست زارعی
اگر کار توالی یابی در آینده انجام شود، می توان آن را بر اساس زیست شناسی مولکولی انجام داد.
اگر توالی در کارهای بعدی مورد نیاز باشد، عموماً برای آزمایش به شرکت ارسال می شود.
اصول اساسی توالی یابی در زیر توضیح داده شده است.
5•2•5 تقویت ژن
واکنش زنجیره ای پلیمراز، یا تکنولوژی PCR، روشی برای تکثیر سریع ژن های خاص یا توالی های DNA در شرایط آزمایشگاهی است. این می تواند واکنشی را در یک لوله آزمایش ایجاد کند و پس از چند ساعت می تواند مقدار بسیار کمی از ژن هدف یا یک قطعه DNA خاص را صدها هزار یا حتی میلیون ها بار تقویت کند.
اصل فناوری PCR نمونه تدریس زیست زارعی
ابتدا مولکول DNA دو رشته ای حرارت داده می شود و در دمایی نزدیک به نقطه جوش به دو مولکول DNA تک رشته ای جدا می شود. مخلوطی برای سنتز زنجیره تکمیلی DNA جدید از آنجایی که DNA پلیمرازها برای شروع ("پرایم") سنتز رشته جدید به کشش کوچکی از DNA دو رشته ای نیاز دارند، منشاء رشته DNA تازه سنتز شده توسط یک جفت آغازگر الیگونوکلئوتیدی اضافه شده به مخلوط واکنش روی الگو مشخص می شود. رشته DNA با بازپخت هر دو انتها مشخص می شود.
کل فرآیند واکنش PCR نمونه تدریس زیست زارعی
سه مرحله ذوب DNA (دناتوره کردن)، اتصال پرایمر به DNA الگو (بازپخت) و سنتز DNA (بسط) به طور مداوم تکرار می شود. پس از چندین چرخه، تعداد DNA دو رشته‌ای موجود در مخلوط واکنش، یعنی تعداد کپی‌های قطعه DNA بین دو محل آغازگر، دارای حداکثر مقدار نظری 2n است.
5•3 سیستم ناقل اصلی برای شبیه سازی ژن نمونه تدریس زیست زارعی
5•3•1 DNA پلاسمید و جداسازی و خالص سازی آن
پلاسمید باکتری نوعی جزء ژنتیکی است که مستقل از کروموزوم در سیتوپلاسم وجود دارد و می تواند به طور مستقل تکثیر شود. پلاسمیدها از دو رشته ای حلقوی تشکیل شده اند. DNA. Replicon های متشکل از (مقدار کمی از پلاسمیدهای خطی و پلاسمیدهای RNA گزارش شده است). مولکول های DNA پلاسمید می توانند به طور پایدار در حالت اپیزومی خارج کروموزومی باشند، یا ممکن است تحت شرایط خاصی به صورت برگشت پذیر در کروموزوم میزبان ادغام شوند، با همانندسازی کروموزوم تکثیر شوند و از طریق تقسیم سلولی به فرزندان منتقل شوند.
5•3•1•1 سانتریفوژ شیب چگالی کلرید سرب نمونه تدریس زیست زارعی
DNA پلاسمید معمولاً تنها حدود 1% تا 2% از کل DNA سلول را تشکیل می دهد و هیچ تفاوتی بین ساختار شیمیایی آن و DNA کروموزومی میزبان وجود ندارد. بنابراین، DNA پلاسمید تطهیر این دو باید بر اساس تفاوت در ساختار بالاتر این دو باشد. در فرآیند لیز سلولی و جداسازی DNA، DNA کروموزومی باکتریایی با وزن مولکولی زیاد مستعد شکستگی برای تشکیل قطعات خطی مربوطه است، در حالی که DNA پلاسمید به دلیل وزن مولکولی کوچک و ساختار فشرده هنوز می تواند یک ساختار دایره ای کامل را حفظ کند.
5•3•1•2 روش دناتوراسیون قلیایی نمونه تدریس زیست زارعی
وقتی محلول DNA در pH 12.0-12.5 گرم شود، DNA خطی دناتوره می شود، اما DNA پلاسمید دایره ای بسته دناتوره نمی شود، اگرچه پیوندهای هیدروژنی بین رشته های DNA مکمل در چنین شرایطی دناتوره نمی شود. ،نمونه تدریس زیست زارعی اما دو رشته مکمل به دلیل پیچیدگی متقابل ستون فقرات مارپیچ دوگانه DNA پلاسمید دایره ای بسته همچنان محکم به یکدیگر متصل می شوند. در مقابل، دو رشته DNA خطی کاملاً از هم جدا شده اند. DNA پلاسمید را می توان به سرعت و با دقت تغییر داد اگر مخلوط DNA با سرد کردن یا خنثی سازی پردازش شود، اما بازسازی مجدد بین رشته های مکمل جدا شده مولکول های DNA کروموزومی خطی که توسط شکست های تصادفی تولید می شوند، چندان سریع نخواهد بود. نمونه تدریس زیست زارعی
ساختار شبکه ای را تشکیل می دهد که با سانتریفیوژ کردن همراه با پروتئین های دناتوره شده و RNA ها رسوب می کند. DNA پلاسمید باقی مانده در مایع رویی را می توان با رسوب الکلی جمع آوری کرد. این در حال حاضر محبوب ترین روش است.
5•3•2 وکتور پلاسمید مهم اشرشیاکلی ناقل پلاسمید
5•3•2•1pSC101
pSC101 یک ناقل پلاسمید اشریشیا کلی با تعداد کم کپی است و به طور متوسط تنها 1 تا 2 کپی در هر سلول میزبان دارد. اندازه مولکولی آن 9.09 کیلوبایت است و یک ژن مقاومت به تتراسایکلین (tetr) را کد می کند. پلاسمید دارای محل برش منفرد برای 7 اندونوکلئاز محدود شامل EcoRI، Hin dIII، Bam HI، Sal I، Xho I، Pvu II و Sma I و 3 محل شامل Hin dIII، Bam HI و Sal I است. شبیه سازی نقطه ای نتایج DNA اگزوژن در غیر فعال سازی ژن tetr
وکتور پلاسمید 5•3•2•2 pBR322
به منظور بهبود تکنولوژی غربالگری ترانسفورماتور، لازم است یک نشانگر انتخاب قوی با مقاومت دارویی چندگانه، وزن مولکولی کم، کپی بالا و درج DNA خارجی بر عملکرد همانندسازی اثری نداشته باشد. انواع مکان های برش تک اندونوکلئاز محدود و سایر مزایای یک ناقل پلاسمید جدید. در حال حاضر، پلاسمید pBR322 که به طور گسترده در شبیه سازی ژن استفاده می شود نمونه تدریس زیست زارعی ، یک ناقل پلاسمید E. coli است که بر اساس این ایده ساخته شده است.
5•3•3 λ ناقل فاژ
باکتریوفاژ یک اصطلاح کلی برای دسته ای از ویروس های باکتریایی است.نام انگلیسی bacteriophage است که از کلمه یونانی "phagos" به معنی فاگوسیتوز گرفته شده است. مانند مولکول‌های پلاسمید، فاژها نیز می‌توانند برای شبیه‌سازی و تکثیر قطعات خاص DNA مورد استفاده قرار گیرند و آنها را به یک ناقل شبیه‌سازی ژن خوب تبدیل کند. به عنوان یک انگل باکتریایی، فاژ زمانی که از سلول میزبان جدا می شود می تواند زندگی خود را حفظ کند، اما زمانی که از سلول میزبان جدا شود، نه می تواند رشد کند و نه تکثیر شود، زیرا اکثر فاژها فقط می توانند از ریبوزوم میزبان، فاکتورهای پروتئین استفاده کنند. سنتز، اسیدهای آمینه مختلف و سیستم های متابولیسم انرژی برای رشد و تکثیر.
در هر دو انتهای مولکول DNA دو رشته ای خطی فاژ λ، یک توالی اورهانگ تک رشته ای 5' 12 نوکلئوتیدی (انتهای چسبنده) وجود دارد که کاملا مکمل یکدیگر هستند. هنگامی که مولکول DNA خطی باکتریوفاژ λ به سلول میزبان آلوده تزریق می شود، یک مولکول DNA دو رشته ای دایره ای از طریق مکمل بین انتهای چسبنده تشکیل می شود. سپس گروه های 5'-P و 3'-OH مجاور توسط DNA لیگاز مسدود می شوند. قطعه دو رشته‌ای که توسط این اتصال انتهایی منسجم ایجاد می‌شود، / ر نمونه تدریس زیست زارعی سایت انتهایی منسجم (cohesive-end site) نامیده می‌شود.
2 • ناقل جایگزین
همچنین به عنوان بردار جایگزینی (بردار جایگزینی) شناخته می شود که بر اساس فاژ λ بازسازی می شود و دارای یک قطعه DNA در قسمت مرکزی آن است که می تواند توسط یک مولکول DNA درج شده برون زا جایگزین شود. هنگامی که DNA اگزوژن در چنین ناقلی قرار می‌گیرد، قطعات DNA بین یک جفت مکان شبیه‌سازی جایگزین می‌شوند و در نتیجه به طور موثر توانایی شبیه‌سازی قطعات DNA خارجی را بهبود می‌بخشند.
5•3•4 Cosmid vector
کلمه “Cosmid” از کلمه انگلیسی “cos site-carring plasmid” مخفف شده است و معنای اصلی آن به پلاسمید با محل انتهایی چسبنده اشاره دارد. Cosmid نوع خاصی از ناقل پلاسمید است که به طور مصنوعی ساخته شده و حاوی توالی cos λDNA و replicon پلاسمید است.
ناقل کازمید pHC79 دارای مزایای هر دو وکتور فاژ λ و ناقل پلاسمید pBR322 است. ظرفیت شبیه سازی آن 31-45 کیلوبایت است و می توان آن را در ذرات فاژ عفونی بسته بندی کرد.
ویژگی های ناقل
کیهانی اول اینکه ویژگی های فاژ λ را دارد. پس از شبیه‌سازی DNA اگزوژن با طول مناسب و بسته‌بندی به ذرات فاژ در شرایط آزمایشگاهی، سلول‌های میزبان E. coli حساس به فاژ λ را می‌توان به طور موثر ترانسفکت کرد. مولکول DNA کیهانی،نمونه تدریس زیست زارعی پس از ورود به سلول میزبان، می تواند به همان روشی که DNA فاژ لامبدا را به گردش در می آورد.
دوم اینکه ویژگی های ناقل پلاسمید را دارد. وکتورهای کیهانی دارای مشابه پلاسمیدی هستند، بنابراین می توانند مانند DNA پلاسمید در سلول های میزبان تکثیر شوند نمونه تدریس زیست زارعی و تحت تأثیر کلرامفنیکل می توانند بیشتر تقویت شوند.
5•4 جداسازی و شناسایی ژن ها
در تحقیقات مختلف در علوم زیستی از کلون استفاده زیادی می شود. معمولاً شبیه سازی تولید مثل غیرجنسی است. معنی در سطوح مختلف:
در سطح فردی ارگانیسم های چند سلولی بالاتر، نمونه تدریس زیست زارعی کلون به معنای گروهی متشکل از دو یا چند فرد از یک گونه با ژنوتیپ یکسان است؛ دوقلوهای تک تخمکی که از یک تخم بارور شده یکسان جدا شده اند متعلق به یک کلون هستند.
در سطح سلولی، کلون به جمعیتی از سلول های دختر یکسان ژنتیکی اطلاق می شود که از یک سلول پیش ساز تقسیم می شوند.
در زیست شناسی مولکولی، فرآیند قرار دادن DNA اگزوژن در یک DNA ناقل دارای قابلیت همانندسازی به طوری که بتوان آن را به طور دائم حفظ و تکثیر کرد، شبیه سازی نامیده می شود.
5•4•l تولید و جداسازی قطعات DNA
جمعیتی از قطعات DNA شامل "ژن هدف" را از مواد آزمایشی تهیه کنید، که باید شامل کل توالی کل ژنوم باشد و اندازه قطعات DNA باید مناسب باشد. برای نیازهای دستکاری ژن
5•4•2 ساخت مولکول های DNA نوترکیب
1• درج جهت قطعات DNA اگزوژن در مولکول ناقل: مولکول ناقل و مولکول DNA که قرار است شبیه سازی شود با یک جفت (NE1 و NE2) بریده می شوند و این دو در یک جهت بازپخت می شوند تا یک مولکول DNA نوترکیب را تشکیل دهند. ، حصول اطمینان از اینکه قطعه DNA اگزوژن درج مستقیم مولکول های ناقل است.
اگر مولکول ناقل و درج DNA اگزوژن نتوانند انتهای چسبنده مکملی تولید کنند، از روش اتصال آداپتور برای بهبود کارایی بستن بین انتهای بلونت استفاده می‌شود.
2•واکنش بستن بهینه
خود مولکول ناقل خطی پس از برش اندونوکلئاز محدود اجازه چرخش مجدد را نمی دهد. درمان مولکول ناقل خطی حاصل از هضم اندونوکلئاز با آلکالین فسفاتاز، انتهای 5'-P DNA را حذف می کند و یک گروه 5'-OH باقی می ماند. هنگامی که قطعه DNA اگزوژن وارد می شود، 5' انتهای آن -P است که نوترکیبی کارآمد را ممکن می کند.
3• راه های معرفی مولکول های نوترکیب به سلول های گیرنده
راه های اصلی معرفی مولکول های نوترکیب اگزوژن به سلول های گیرنده عبارتند از تبدیل (یا ترانسفکشن)، ترانسداکشن، میکرواینجکشن و الکتروپوریشن. تبدیل و انتقال عمدتاً برای سلول‌های یوکاریوتی پایین‌تر مانند باکتری‌هایی مانند سلول‌های پروکاریوتی و مخمر اعمال می‌شود، در حالی که میکرواینجکشن و الکتروپوریشن عمدتاً برای سلول‌های یوکاریوتی حیوانات بالاتر اعمال می‌شوند. در مهندسی ژنتیک به تفصیل توضیح داده شده است.
5•4•3 شبیه سازی ژن cDNA
DNA ژنوم یوکاریوتی بزرگ است و حاوی تعداد زیادی توالی و اینترون های تکراری است، بنابراین جداسازی مستقیم ژن هدف دشوار است. می توان تا حدی
