کروماتوگرافی ستونی به عنوان تکنیک مفیدی توصیف میشود که در آن موادی که قرار است جداسازی شوند در بالاترین نقطه ستونی که با یک جاذب بارگذاری شده است (فاز ثابت) ارائه میشوند و با سرعتهای مختلف از ستون عبور میکنند که به میل ترکیبی هر ماده بستگی دارد. جاذب و حلال یا مخلوط حلال، و معمولاً هنگام عبور از ستون در زمان های مختلف در محلول جمع می شوند.
دو نمونه رایج از فازهای ثابت برای کروماتوگرافی ستونی سیلیکاژل و آلومینا هستند در حالی که حلال های آلی به عنوان رایج ترین فازهای متحرک در نظر گرفته می شوند.
اصل اصلی در کروماتوگرافی ستونی، جذب املاح محلول با کمک یک فاز ساکن و سپس جداسازی مخلوط به اجزای مستقل است.
در نقطه ای که فاز متحرک همراه با مخلوطی که نیاز به جداسازی دارد از بالای ستون وارد می شود، حرکت تک تک اجزای مخلوط با سرعت های مختلفی انجام می شود.
اجزایی که جذب و میل ترکیبی کمتری نسبت به فاز ساکن دارند، در مقابل جذب بیشتر و میل ترکیبی با فاز ساکن، سریعتر خارج میشوند. اجزایی که به سرعت حرکت می کنند ابتدا از طریق اجزایی که به آرامی حرکت می کنند خارج می شوند و در آخر شسته می شوند.
جذب مولکول های املاح به ستون به صورت برگشت پذیر اتفاق می افتد. سرعت حرکت اجزا به صورت زیر اعلام می شود:
Rf = the distance traveled by solute / the distance traveled by the solvent
Where Rf is called retardation factor
اجزای یک سیستم کروماتوگرافی معمولی با استفاده از فاز متحرک گاز یا مایع عبارتند از:
فاز متحرک به عنوان یک حلال، یک عامل توسعه دهنده (جداسازی اجزای نمونه را برای تشکیل نوارها ترویج می کند)، و یک عامل شستشو (برای حذف اجزایی از ستون که در طول آزمایش جدا شده اند) عمل می کند.
برای کروماتوگرافی مایع:2-50 سانتی متر طول و 4 میلی متر قطر داخلی، ساخته شده با فولاد ضد زنگ
برای کروماتوگرافی گازی:1-3 متر طول و 2-4 میلی متر قطر داخلی، ساخته شده با شیشه یا فولاد ضد زنگ
مواد یک ستون و ابعاد آن برای پشتیبانی از فاز ثابت و ارتقای جداسازی موثر بسیار حیاتی است.
یک کلکتور در پایین در انتهای پایین ستون قرار داده شده است تا آنالیت های جدا شده را جمع آوری کند.
روش کروماتوگرافی ستونی
مراحل موجود در کروماتوگرافی ستونی عبارتند از:
دو نوع آماده سازی ستون که به عنوان تکنیک های بسته بندی شناخته می شوند عبارتند از:
ستون باید قبل از استفاده به خوبی شسته و کاملاً خشک شود.
از طریق این تکنیک، اجزای جداگانه به طور کامل از ستون جدا می شوند.
فرآیند شستشو را می توان با استفاده از دو تکنیک انجام داد:
مثال: استفاده از کلروفرم به تنهایی
مثال: بنزن → کلروفرم → اتیل استات → کلروفرم
موارد استفاده از کروماتوگرافی ستونی
کروماتوگرافی ستونی یکی از روش های همه کاره برای خالص سازی و جداسازی جامدات و مایعات است.
کاربردهای عمده:
منابع:
شرکت شناساپرتوژن تامین کننده انواع دستگاه کروماتوگرافی GC , HPLC ساخت کمپانی های Agilent , Waters , ... می باشد . جهت کسب اطلاعات بیشتر با شرکت شناساپرتوژن در ارتباط باشید.
ارتباط با ما
آدرس : تهران - میرداماد - خیابان کازرون شمالی - کوچه نیک رای - پلاک 3 - طبقه 6 - واحد 13
شماره تماس : 02175311 - 02122919474 - 02122919720
شماره واتساپ : 09199060602
ایمیل : sales1.vtk@gmail.com
وب سایت : https://partogene.com
تخمین داروها در فرمولاسیون دارویی, جداسازی متابولیت ها از مایعات بیولوژیکی, حذف ناخالصی ها یا انجام فرآیند تصفیه, کروماتوگرافی ستونی, کروماتوگرافی گازی (GC), کروماتوگرافی مایع, کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC)