کشت بافت یک فرآیند طولانی و پر زحمت است و زمانی که قارچ یا باکتری به کشت های دوست داشتنی ما حمله می کند، احساس آزاردهنده می کند.
کشت سلول ها در آزمایشگاه ها نیازمند تلاش زیادی است، از آماده سازی محیط و انتقال سلول گرفته تا نگهداری منظم. اما متأسفانه، اگر سلول‌ها آلوده شوند و کشت‌ها از بین بروند، منجر به از دست دادن زمان، تلاش و هزینه زیادی می‌شود. اگر ندانید کشت شما چگونه آلوده شده و چه نوع آلودگی دارد، مشکل بزرگتر می شود!
ویرانگر است و شما چاره ای جز تکرار آزمایشات برای نجات تحقیقات خود ندارید.
آلودگی کشت بافت به دو گروه آلودگی شیمیایی و آلودگی بیولوژیکی طبقه بندی می شود .
آلودگی شیمیایی به دلیل وجود هر گونه اجزای غیر زنده ای رخ می دهد که بر رشد کشت شما تأثیر منفی می گذارد.
منابع و انواع آلودگی های شیمیایی عبارتند از:
محیط کشت : محیط کشت سلولی حاوی مواد مغذی، معرف ها و آب است که منابع اصلی آلودگی هستند.
سرم: تقویت کننده مواد مغذی برای کشت سلولی است. حاوی پروتئین، هورمون و برخی عوامل رشد است که رشد بافت را تحریک می کند. با این حال، تغییر در غلظت هورمون‌ها و فاکتورهای رشد می‌تواند برای کشت‌های سلولی سمی باشد.
اندوتوکسین: محصول جانبی باکتری های گرم منفی است و در آب، سرم یا سایر اجزای کشت یافت می شود. می توان آن را با روش لیمولوس آمبوسیت لیزات (LAL) تعیین کرد.
لوله‌های پلاستیکی و مخازن ذخیره‌سازی: باقیمانده‌های شیمیایی (مواد شوینده یا ضدعفونی‌کننده‌ها) در ظرف ذخیره‌سازی تمیز نشده هنگام انتقال به ظروف به داخل محیط می‌روند. علاوه بر این، نرم کننده ها نیز می توانند بر رشد کشت تأثیر بگذارند.
نور فلورسنت: می‌تواند برخی از اجزای رسانه‌ای مانند ریبوفلاوین و تریپتوفان را که پراکسید هیدروژن و رادیکال‌های آزاد سمی برای سلول‌ها آزاد می‌کنند، فعال کند.
آلودگی بیولوژیکی به دلیل وجود موجودات زنده در کشت ایجاد می شود. چنین ارگانیسم هایی شامل باکتری ها، مخمرها و کپک های به راحتی قابل شناسایی یا ویروس ها، تک یاخته ها و مایکوپلاسماها هستند.
باکتری ها، مخمرها و کپک ها در طبیعت در همه جا وجود دارند. بنابراین، آنها به راحتی می توانند به صورت مخفیانه وارد شوند، مستعمره شوند و در کشت های سلولی رشد کنند. از آنتی بیوتیک ها برای جلوگیری از کشت باکتری ها استفاده می شود، با این حال، برخی از سویه های مقاوم همچنان می توانند در آن رشد کنند.
باکتری‌های بسیار کوچک یا درون سلولی با رشد آهسته‌ای وجود دارند که به سختی می‌توان در طول بررسی‌های معمول کشت‌ها متوجه آنها شد. آنها می توانند به چندین کشت آسیب جدی وارد کنند.
شناسایی ویروس، تک یاخته و مایکوپلاسما که ماهیت درون سلولی دارند دشوار است. آنها نه تنها کل کشت سلولی را از بین می برند بلکه خطرات بالقوه ای برای سلامت انسان نیز به همراه دارند.
برای جلوگیری از آلودگی و صرفه جویی در کشت و آزمایش خود، باید اقدامات احتیاطی ارائه شده در زیر را «قبل و در حین» آزمایشات کشت بافت خود دنبال کنید:
دستکش و کت آزمایشگاه بپوشید و سازماندهی کنید: آیا تا به حال فکر کرده اید که ممکن است خودتان سلول های کشت شده را آلوده کنید؟ بله این درست است! بدن انسان مملو از باکتری است. بنابراین، بهتر است از دستکش و کت آزمایشگاهی خود استفاده کنید. باید در داخل آزمایشگاه نگهداری شود و به طور مرتب تمیز شود. همچنین می‌توانید چیزهایی را که باید به اتاق تأسیسات ببرید فهرست کنید و این به شما کمک می‌کند تا آزمایش‌های خود را در یک مرحله به پایان برسانید.
از مواد شیمیایی با عیار بالا استفاده کنید: در آزمایشات خود فقط از رسانه ها و سرم های معتبر و با درجه بالا استفاده کنید. همچنین آب و محیط کشت باید به خوبی استریل شود.
تجهیزات آزمایشگاهی را استریل کنید: تجهیزات آزمایشگاه را همیشه اتوکلاو کنید، مانند نوک پیپت، ظرف ذخیره، بشر، فورسپس و غیره. قبل از آن، مطمئن شوید که تجهیزات شما قابل اتوکلاو هستند!
امکانات را بررسی کنید: به طور منظم مرکز یا اتاقی را که سلول ها در آن کشت می شوند تمیز و استریل کنید. عملکرد جریان آرام و انکوباتورها را نیز بررسی کنید. قبل از انجام آزمایش، سطح لامینار و سایر تجهیزات را با الکل 70 درصد پاک کنید.
بررسی سلول‌های وارد شده: اگر سلول‌ها را از یک شرکت یا آزمایشگاه‌های دیگر وارد می‌کنید، بهتر است سلول را با کشت کشت حداقل به مدت دو هفته بررسی کنید. این به شما کمک می کند تا قبل از اینکه سلول ها را در مقیاس بزرگ کشت کنید، در واکنشگرها و تلاش خود صرفه جویی کنید.
از قرار گرفتن سلول در محیط های استریل نشده اجتناب کنید: همیشه سعی کنید سلول ها را در یک محیط استریل نگه دارید. انتقال سلول ها از انکوباتور به هود باید سریع باشد. اگر سلول های شما برای مدت طولانی بیرون مانده اند، آنها را در یک هود دیگر نگه دارید. این به شما کمک می کند تا کشت های دیگر خود را نیز نجات دهید.
به طور منظم سلول های کشت شده را بررسی کنید: شما کارهای زیادی برای محافظت از سلول های خود انجام داده اید و نمیخواهید در پایان کشت خود را آلوده کنید! بنابراین، مراقب کشت های خود باشید و به طور مرتب آنها را تماشا کنید.
اگرچه، به احتمال زیاد با دنبال کردن مراحل بالا می‌توانید کشت خود را نجات دهید، دقیق بودن و سازگاری با «بهترین شیوه‌ها» به همان اندازه دشوار است. با این روش ها فقط می توانید از آلودگی شیمیایی و تا حدی آلودگی بیولوژیکی نیز جلوگیری کنید. اما،با شروع مقاومت باکتری ها نسبت به آنتی بیوتیک ها، آنها دیگر بهترین راه حل برای جلوگیری از آلودگی بیولوژیکی در کشت شما باقی نمی مانند.
